細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 小鼠骨細(xì)胞

組織來源 骨組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 小鼠骨細(xì)胞分離自骨組織；骨組織的細(xì)胞成分包括骨原細(xì)胞、成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞。只有骨細(xì)胞存在于骨組織內(nèi)，其他三種細(xì)胞均位于骨組織的邊緣。骨細(xì)胞（Osteocyte）是人體骨骼中主要的細(xì)胞成分。在成年人骨骼中，骨細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)量的90%-95%，大約是成骨細(xì)胞數(shù)量的20倍。骨細(xì)胞生長在骨骼內(nèi)部的骨基質(zhì)中。骨細(xì)胞的細(xì)胞體呈梭形或類圓形，位于基質(zhì)構(gòu)成的骨陷窩內(nèi)。與神經(jīng)細(xì)胞類似，每個骨細(xì)胞具有大量向外延伸的突觸，而這些突觸均位于由骨基質(zhì)構(gòu)成的骨小管結(jié)構(gòu)中。通過這些突觸，骨細(xì)胞能夠與骨表面的細(xì)胞、周圍其它的骨細(xì)胞進(jìn)行“交流"。普遍認(rèn)為，骨細(xì)胞起源于成骨細(xì)胞。在骨形成的終末階段，成骨細(xì)胞將可能有3種不同的歸宿：分化成為骨細(xì)胞、轉(zhuǎn)移至骨表面成為暫不活動的成骨細(xì)胞、進(jìn)入程序死亡過程（凋亡）。骨細(xì)胞為扁橢圓形多突起的細(xì)胞，核亦扁圓、染色深。胞質(zhì)弱嗜堿性。電鏡下，胞質(zhì)內(nèi)有少量溶酶體、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復(fù)合體亦不發(fā)達(dá)。骨細(xì)胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi)。相鄰骨細(xì)胞的突起之間有縫隙連接。在骨基質(zhì)中，骨細(xì)胞胞體所占據(jù)的橢圓形小腔，稱為骨陷窩，其突起所在的空間稱骨小管。相鄰的骨陷窩借骨小管彼此通連。骨陷窩和骨小管內(nèi)均含有組織液，骨細(xì)胞從中獲得養(yǎng)分。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨細(xì)胞采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨細(xì)胞經(jīng)骨鈣素免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠骨細(xì)胞 培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 不增殖；不傳代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。