細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞

組織來源 眼球

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞分離自視神經(jīng)乳頭；視乳頭位于黃斑區(qū)鼻側(cè)附近，境界清楚，呈白色、圓盤狀，因此也稱為視盤。視網(wǎng)膜上視覺纖在此匯集，并于此穿出眼球向視中樞傳遞。視乳頭有小凹陷區(qū)，稱為視杯或生理凹陷。視乳頭是視神經(jīng)纖聚合組成視神經(jīng)的起始端，它沒有視細(xì)胞，因而沒有視覺，在視野中是生理盲點(diǎn)。視乳頭是開角型青光眼早受損的部位，星形膠質(zhì)細(xì)胞是視神經(jīng)乳頭處主要的膠質(zhì)細(xì)胞類型，可為視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞無髓鞘的軸突提供結(jié)構(gòu)和生物支持。青光眼視變是全球不可逆性致肓眼病。青光眼視變以視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突喪失并伴有視乳頭處細(xì)胞外基質(zhì)重坦為主要特征。導(dǎo)致視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞喪失的病理生理機(jī)制尚未闡明，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)調(diào)控神經(jīng)元微環(huán)境起多重作用，越來越多的證據(jù)表明膠質(zhì)細(xì)胞町能對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、損傷、修復(fù)及再生起極為關(guān)鍵的作用。視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體多扁平，體積較大，形狀多呈不規(guī)則的多邊形，突起較粗，胞核為橢圓形，核仁清晰可見，核周有較密集物質(zhì)，胞質(zhì)稀疏，骨架結(jié)構(gòu)良好，明顯不同于長(zhǎng)梭形的成纖細(xì)胞形態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 兔視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。