細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 兔精原干細(xì)胞

簡稱 SSCs

組織來源 睪丸組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5cells/T25

細(xì)胞簡介 兔精原干細(xì)胞分離自睪丸組織；睪丸是雄性生殖器官，也叫精巢，具體結(jié)構(gòu)包括生精小管以及周圍的結(jié)締組織。生精小管也叫曲精小管、曲細(xì)精管，是睪丸上細(xì)長而彎曲的管道。精原干細(xì)胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的群生精干細(xì)胞，是成體內(nèi)的定向干細(xì)胞。精原干細(xì)胞的些獨(dú)特優(yōu)勢使其成為動(dòng)物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細(xì)胞。精原干細(xì)胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項(xiàng)生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)機(jī)制的深入研究，精子發(fā)生機(jī)理的進(jìn)步闡明以及精原干細(xì)胞轉(zhuǎn)染，異體、異種移植技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用，都迫切需要找到種可行的方法將其分離純化，以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細(xì)胞用于體外培養(yǎng)。在哺乳動(dòng)睪丸內(nèi)，精子發(fā)生時(shí)個(gè)受高度調(diào)控和持續(xù)的過程，精原干細(xì)胞（SSCs）方面進(jìn)行自我更新持干細(xì)胞數(shù)量，另方面又不斷執(zhí)行分化成各級(jí)生精細(xì)胞直至后生成精子。精原干細(xì)胞定居在曲精細(xì)管上皮的基膜處，是哺乳動(dòng)物精子發(fā)生的原始細(xì)胞，也是動(dòng)物體內(nèi)起能將遺傳信息傳遞的干細(xì)胞。精原干細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。精原干細(xì)胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的群細(xì)胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，是哺乳動(dòng)物體內(nèi)能將遺傳信息傳遞給下代的成體干細(xì)胞。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔精原干細(xì)胞采用先機(jī)械吹打、后消化，結(jié)合Percoll密度梯度離心法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的兔精原干細(xì)胞經(jīng)c-kit免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 兔精原干細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、bFGF、GDNF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、圓形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。