商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 人皮膚肥大細(xì)胞

組織來源 皮膚組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 人皮膚肥大細(xì)胞分離自皮膚組織；皮膚肥大細(xì)胞廣泛分布于皮膚微血管周圍，分泌多種細(xì)胞因子，參與免疫調(diào)節(jié)（T細(xì)胞、B細(xì)胞、APC細(xì)胞活化）。皮膚肥大細(xì)胞表達(dá)MHC分子、B7分子，具有APC功能。表達(dá)大量的IgE-Fc受體，釋放過敏介質(zhì)。具有弱吞噬功能，和血液的嗜堿粒細(xì)胞同樣，具有強(qiáng)嗜堿性顆粒的組織細(xì)胞。存在于血液中的這類顆粒，含有肝素、組織胺、5-羥色胺，由細(xì)胞崩解釋放出顆粒以及顆粒中的物質(zhì)，可在組織內(nèi)引起速發(fā)型過敏反應(yīng)（炎癥）。由于在肥大細(xì)胞上結(jié)合的IgE抗體和抗原的接觸，使細(xì)胞多陷于崩壞。肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形，細(xì)胞核小，呈圓形或橢圓形，染色淺，位于細(xì)胞。細(xì)胞常成堆或單個(gè)分布于血管附近。細(xì)胞呈圓形或卵圓形，細(xì)胞質(zhì)中充滿大小一致、染成藍(lán)紫色的顆粒，均勻分布在核周圍。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的人皮膚肥大細(xì)胞采用膠原酶-混合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人皮膚肥大細(xì)胞經(jīng)CD117免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人皮膚肥大細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 圓形、梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代

消化液：0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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