細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞

組織來源 關(guān)節(jié)韌帶

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞分離自關(guān)節(jié)韌帶組織；韌帶是纖維結(jié)締組織，將各個(gè)骨頭在關(guān)節(jié)處連接起來，并在關(guān)節(jié)活動時(shí)加固關(guān)節(jié)穩(wěn)定關(guān)節(jié)。其中顳下頜關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)韌帶組織研究較多，顳下頜關(guān)節(jié)兩側(cè)各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關(guān)節(jié)周圍韌帶根據(jù)其解剖位置可以分成3組，外側(cè)韌帶，內(nèi)側(cè)三角韌帶，脛腓聯(lián)合韌帶。膝關(guān)節(jié)的韌帶有囊外韌帶和囊內(nèi)韌帶，其共同作用為加強(qiáng)關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關(guān)節(jié)囊的前方，是股四頭肌肌腱的延續(xù)，向下附著于脛骨粗隆，兩側(cè)有側(cè)副韌帶加強(qiáng)；囊內(nèi)韌帶:主要為交叉韌帶。前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側(cè)髁的內(nèi)側(cè)面，防止脛骨過度前移；后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內(nèi)側(cè)髁的外側(cè)面，防止脛骨過度后移。另外，在膝關(guān)節(jié)內(nèi)尚有膝橫韌帶。任何關(guān)節(jié)韌帶均可由于外傷而發(fā)生損傷，但影響較大又較常見的是膝關(guān)節(jié)韌帶損傷和踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。膝關(guān)節(jié)韌帶損傷，常見者為膝關(guān)節(jié)側(cè)副韌帶損傷。多因膝關(guān)節(jié)微屈時(shí)，突然受到內(nèi)翻或外翻的沖擊力所致。踝關(guān)節(jié)韌帶損傷。多因行走或跑跳時(shí)誤入不平之處所致。以外側(cè)損傷多見。韌帶是致密纖維結(jié)締組織，主要特點(diǎn)是細(xì)胞、基質(zhì)成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強(qiáng)的保護(hù)和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細(xì)胞。人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞對研究關(guān)節(jié)韌帶損傷有重要意義。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人關(guān)節(jié)韌帶成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖維細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。