實驗過程：
一、自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Amycolata autotrophica
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產(chǎn)品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
Bunostomum trigonocephalum羊仰口線蟲PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌，形成芽孢。

Bunostomum trigonocephalum羊仰口線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌，形成芽孢。

Bunostomum trigonocephalum羊仰口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌，形成芽孢。

Bunyamwera Virus布尼亞維拉病毒RT-PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌，形成芽孢。模式菌株

Bunyamwera Virus布尼亞維拉病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細菌，形成芽孢。

Bunyamwera Virus布尼亞維拉病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細菌，形成芽孢。模式菌株

Burkholderia cepacia洋蔥伯克氏菌PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。

Burkholderia cepacia洋蔥伯克氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。模式菌株

Burkholderia cepacia洋蔥伯克氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。維生素B12測定菌；6APA, 7ADCA;

Burkholderia mallei鼻疽伯克霍爾德氏菌PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。具有典型的生物化學特性

Burkholderia mallei鼻疽伯克霍爾德氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。VB12缺陷型，維生素B12測定菌；青霉素酰化酶，6-APA，

Burkholderia mallei鼻疽伯克霍爾德氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株分析檢測革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。測定VB12; 青霉素?；?

Burkholderia pseudomallei類鼻疽伯克霍爾德菌PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。測定維生素B12；青霉素酰化酶;

Burkholderia pseudomallei類鼻疽伯克霍爾德菌染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。

Burkholderia pseudomallei類鼻疽伯克霍爾德菌探針法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細菌，化能異養(yǎng)，兼性厭氧，發(fā)酵代謝。λDNA的產(chǎn)生菌
自養(yǎng)無枝酸菌探針法熒光定量PCR試劑盒乙醇胺磷酸磷酸裂解酶　AT2L1 Polyclonal Antibody

胰高血糖素樣肽2受體　GLP2R Polyclonal Antibody

胰高血糖素樣肽1受體　GLP1R Polyclonal Antibody

胰多肽原　PAHO Polyclonal Antibody

胰島素誘導基因2　INSI2 Polyclonal Antibody

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白樣1　IBPL1 Polyclonal Antibody

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5　IBP5 Polyclonal Antibody

胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4　IBP4 Polyclonal Antibody

胰島素樣生長因子2-mRNA結(jié)合蛋白1　IF2B1 Polyclonal Antibody
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。