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當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒50T莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介

莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

更新時(shí)間:2020-09-29
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:329
產(chǎn)品型號(hào):50T
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實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由
(1)高溫變性模板;
(2)引物與模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
【產(chǎn)品名稱】莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Moraxella spp.
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6936
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè),所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀,可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針,通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR(Taqman探針法)對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板,擴(kuò)增β-actin基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng),擴(kuò)增效率更高。
?
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為:將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為:待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
Oridonin腫瘤壞死因子β檢測(cè)試劑盒20mg

 H4-IIE(大鼠肝細(xì)胞 )5×106cells/瓶×2

狀腺球蛋白(TG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 GFER / ALR 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

MMP8(Human Matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase) ELISA kit  人基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶CAS號(hào):113791 脂氧合酶檢測(cè)試盒100THuman/人Elisa試盒3034488

Sodium Danshensu腫瘤壞死因子γ檢測(cè)試劑盒20mg

偽原薯蕷皂苷 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Pseduoprotodioscin

組蛋白H2B(H2B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)重組人 RGS5 / Regulator of G-protein signaling 5 蛋白 (His 標(biāo)簽)*250(g)

(MMP7(Human Matrix metalloproteinase 7) ELISA kit  人基質(zhì)金屬蛋白酶7CAS號(hào):113617633 總氨基檢測(cè)試盒50THuman/人Elisa試盒3034488

AR1g5g肌(Cr)檢測(cè)試劑盒(去蛋白終點(diǎn)法)SCUBE2

牛磺豬去氧膽鈉 質(zhì)量規(guī)格:≥98%,國(guó)進(jìn)口 Sodium taurohyodeoxycholate hydrate 蓋囊側(cè)耳 Pleurotus cystidiosus中慢生華癸根瘤菌 Mesorhizobium huakuii

Guinea IgG  (親和純化) 豚鼠IgG進(jìn)口、原裝酰輔酶A檢測(cè)試盒25mgHuman/人Elisa試盒4774145

99%5g1g肌(Cr)檢測(cè)試劑盒(PA速率比色法)matrix metalloproteinase 2

千層紙素 訂購(gòu)|咨詢 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg ELISA Kit for Human Axin-1小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體(IGF-1R)ELISA試劑盒,英文名:IGF-1R ELISA Kit

Guinea IgM  (親和純化) 豚鼠IgM現(xiàn)貨供應(yīng)輔酶ASH檢測(cè)試盒500mgHuman/人Elisa試盒4774145

馬卡因CCK試劑盒5mg

京尼平苷(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Geniposidic acid 爪哇根霉無花果曲霉變種 Aspergillus ficuum var.

Nutrient Agar250腮腺炎病IgM抗體檢測(cè)試盒5mg骨堿性酶檢測(cè)試盒N.TerminalPropeptideoftypeICollagen
莫拉氏菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒3O咖酰奎寧;3Ocaffe CAS號(hào): 327979 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

輪環(huán)藤寧;Cyclen CAS號(hào): 294906 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

龍膽山;Bellidifolin CAS號(hào): 2798256 規(guī)格: 10mg 訂購(gòu)|咨詢

麗江頭堿;Foresaconitine CAS號(hào):  規(guī)格: 10mg 訂購(gòu)|咨詢

雷公藤氯內(nèi);Tripchloroli CAS號(hào):  規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

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靈芝A;Ganoderic acid CAS號(hào): 81907622 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

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龍血素C;Cochinchinenin CAS號(hào): 956103790 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

龍血素B ;Loureirin B CAS號(hào): 119425900 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

龍血素A;Loureirin A CAS號(hào): 119425897 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

輪環(huán)藤堿;Cycleanine CAS號(hào): 518945 規(guī)格: 20mg 訂購(gòu)|咨詢

羅紅;Roxithromycin CAS號(hào): 80214831 規(guī)格: 200mg 訂購(gòu)|咨詢

雷公藤吉堿;Wilforgine CAS號(hào): 37239477 規(guī)格: 10mg 訂購(gòu)|咨詢

雷公藤次堿;Wilforine CAS號(hào): 11088098 規(guī)格: 10mg 訂購(gòu)|咨詢

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