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當前位置:首頁產(chǎn)品中心定量PCR試劑盒探針法熒光定量PCR試劑盒50T桔青霉探針法熒光定量PCR試劑盒

桔青霉探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品簡介

桔青霉探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。

更新時間:2020-09-30
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:430
產(chǎn)品型號:50T
詳細介紹在線留言

實驗步驟:
典型的PCR由
(1)高溫變性模板;
(2)引物與模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
【產(chǎn)品名稱】桔青霉探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Penicillium citrinum
【產(chǎn)品編號】YSP7060
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測,所用儀器為實時熒光PCR儀,可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù),針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計特異性引物和熒光探針,通過實時熒光一步法RT-PCR(Taqman探針法)對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板,擴增β-actin基因,與同類產(chǎn)品相比,UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強,擴增效率更高。
?
PCR實驗方法步驟:
桔青霉探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1:1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為:待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù),計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域,所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法,所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
95%100g1g旋覆花內(nèi)886384antitubercle bacilli antobody IgG

 白血病抑制因子(LIF)重組蛋白英文名稱:Recombinant Leukemia Inhibitory Factor (LIF)

生長激素(GH)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 EIF5A2 蛋白 (His 標簽)*250(g)

ABCG2(Human ATPbinding cassette transporter G2) ELISA Kit  人腺苷三結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G2CAS號:47816 總木脂素檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒31027313

包含1500 ppm 對二酚穩(wěn)定劑, 90%5g1mg1beta羥基土木香內(nèi)129000Haptoglobin

香葉木素(標準品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品 Diosmetin

瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 CEBPG / CEBP gamma 蛋白 (His 標簽)*250(g)

GDI(Human Guanine nucleotide dissociation Inhibitor) ELISA Kit  人鳥苷解離抑制子CAS號:162 鳥氨轉(zhuǎn)氨酶檢測試盒100UHuman/人Elisa試盒31027313

JC10  5mg

梣 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 組蛋白賴氨特異性脫甲基酶1抗體 MRGBP ELISA Kit MRG結(jié)合蛋白(MRGBP)ELISA試劑盒

5HTR3(5hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a)  5羥色胺受體3抗原進口、原裝呼腸孤病III型抗體檢測試盒500gHuman/人Elisa試盒49609849

線粒體膜電位檢測試劑盒(JC1)5mg

二氫兩面針堿 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢 Swiss albion小鼠胚胎成纖維細胞英文名稱:3T6

5HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4)  5羥色胺受體4抗原現(xiàn)貨供應(yīng)淋細胞脈絡(luò)叢腦膜炎病IgG抗體檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒49609849

JC15mg

綿萆薢  英文名稱:Dioscorea septemloba Thunb   保存:-20℃   規(guī)格:2g 一氧化合成酶-2抗體  

AT (Angiotenogen)  血管緊張素原(抗原)*流行性出血熱病抗體檢測試盒10gHuman/人Elisa試盒496128
桔青霉探針法熒光定量PCR試劑盒D阿拉伯糖 CAS號: 10323203 規(guī)格: HPLC≥99%;100mg 訂購|咨詢

L組氨鹽鹽 CAS號: 645352 規(guī)格: HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢

L組氨 CAS號: 71001 規(guī)格: HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢

紫草 CAS號: 28831654 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

樟腦 CAS號: 76222 規(guī)格: HPLC≥96%;100mg 訂購|咨詢

月桂(香葉) CAS號: 123353 規(guī)格: HPLC≥80%;0.5mL 訂購|咨詢

羊藿素 CAS號:  規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

異二 CAS號: 78795 規(guī)格: HPLC≥99%;0.5mL 訂購|咨詢

異嗪皮啶 CAS號: 486215 規(guī)格: HPLC≥99%;20mg 訂購|咨詢

異牡荊素 CAS號: 29702258 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

L異亮氨 CAS號: 73325 規(guī)格: HPLC≥98%;200mg 訂購|咨詢

異茴芹內(nèi) CAS號: 482279 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

異佛手柑內(nèi) CAS號: 482484 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

異補骨脂查爾 CAS號: 20784503 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

異補骨脂二黃 CAS號: 31524626 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

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