產(chǎn)品名稱：腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào)：YS-02X9905

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
VEGFR-3/FITC 熒光素標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體-3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

刺激分子B7-1蛋白抗體  CD80/B7-1 0.1ml

SMARCD3 英文名稱： 肌動(dòng)蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體 0.2ml

ETEA 英文名稱： T細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞表達(dá)特應(yīng)性皮炎蛋白ETEA抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-GATA1(ser310) 磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體 規(guī)格 0.1ml

CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator) 囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

IL-12(Interleukin-12)human peptide 白介素12抗原(人)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

 AchE 乙酰膽堿酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CDKN1B/P27kip1 (Thr157) 磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 規(guī)格 0.1ml

人白蛋白干粉 10mg/50mg 國(guó)產(chǎn)

TCAB1 英文名稱： 端粒酶卡哈爾體蛋白抗體 0.2ml

DAAM1 英文名稱： 形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子1抗體 0.1ml

 AchE 乙酰膽堿酶抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Mouse  Goat IgG/FITC FITC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 0.3ml

phospho-FOXO4 (Ser197) 英文名稱： 磷酸化叉頭蛋白4抗體 0.1ml

第八因子相關(guān)抗原抗體  factor VIII 0.1ml

 PGE2/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素E2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-SYT6(Thr418) 磷酸化突觸蛋白6抗體 規(guī)格 0.1ml

Mouse  rabbit IgG/Gold 金標(biāo)記小鼠抗兔IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5ml
腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R精細(xì)胞總蛋白萃取試劑盒20次大鼠胱天蛋白酶9（Casp-9）ELISA試劑盒,

細(xì)胞總核蛋白萃取試劑盒20次大鼠阿立新A（Orexin A）ELISA試劑盒,

細(xì)胞核蛋白核堿性蛋白（nuclear basic protein）萃取試劑盒20次大鼠胰島抗體（ICA）ELISA試劑盒,

子細(xì)胞膜蛋白萃取試劑盒20次大鼠凝溶膠蛋白（Gelsolin）ELISA試劑盒,

細(xì)胞表面蛋白（surface protein）萃取試劑盒20次大鼠肝生長(zhǎng)因子（HGF）ELISA試劑盒,

精漿蛋白（semen plasma protein）萃取試劑盒20次豚鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）ELISA試劑盒,

線蟲精細(xì)胞分離試劑盒20次雞B因子（BF）ELISA試劑盒,

細(xì)胞ATP生物發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次兔子D二聚體（D2D）ELISA試劑盒,

細(xì)胞總抗氧化能力（TAC）化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次兔熱休克蛋白40（HSP-40）ELISA試劑盒,

子細(xì)胞氧化應(yīng)活性氧（ROS）NBT比色法定量檢測(cè)試劑盒100次蓖麻凝集素（RCA）ELISA試劑盒,

精漿（seminal plasma）氧化應(yīng)活性氧（ROS）NBT比色法定量檢測(cè)試劑盒100次軍團(tuán)菌抗原（LP Ag）ELISA試劑盒--動(dòng)物，人

細(xì)胞氧化應(yīng)活性氧（ROS）WST-1比色法定量檢測(cè)試劑盒50次磷脂酶A2（PL-A2）ELISA酶聯(lián)吸附試劑盒--專賣

精漿（seminal plasma）氧化應(yīng)活性氧（ROS）WST-1比色法定量檢測(cè)試劑盒50次膽鹽七葉苷瓊脂

細(xì)胞氧化應(yīng)活性氧/抗氧化能力比值檢測(cè)試劑盒20次結(jié)晶紫增菌液

細(xì)胞丙二醛（MDA）含量比色法定量檢測(cè)試劑盒50次D-谷氨酰