蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！

商品介紹：

相關(guān)產(chǎn)品：

Recombinant Human COX4NB宿主: E.Coli標簽: N-terminal His Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human KIF3A宿主: E.Coli標簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human NSUN5宿主: E.Coli標簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human

Recombinant Human NXN宿主: E.Coli標簽: N-terminal His-IF2DI Tag規(guī)格: 50μg, 200μg, 1mg種屬: Human   

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

注意事項：

1、不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應(yīng)當根據(jù)細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調(diào)整固定時間。

2、雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導(dǎo)致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過 24 小時。

3、醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙。分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或 掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結(jié)果。因此，4%固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復(fù)，然后才能進行免疫染色等后續(xù)操作。

4、本產(chǎn)品對人體有害，操作時請小心，并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。

5、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作 
phospho-Bid (Ser61)產(chǎn)品名稱: BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse

phospho-MAK (Tyr159)產(chǎn)品名稱: 絲氨suan/蘇氨suan蛋白激meiMAK抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

應(yīng)用類型: Other英文名稱: Neuropilin-1英文別名: Neuropilin-1; NRP-1; Neuropilin1; BDCA4; CD 304; CD304; DKFZp686A03134; DKFZp781F1414; NEL like protein 1; Nel related protein 1; Neuropilin1; Neuropilin 1; Neuropilin1 transmembrane receptor; NP1; NRP 1; NRP; NRP1; OTTHUMP00000020818; OTTHUMP00000020820; OTTHUMP00000020821; Vascular endothelial cell growth factor 165 receptor; VEGF165R; A5 protein; BLOOD DENDRITIC CELL ANTIGEN 4; NRP1_HUMAN.

phospho-MCK10 (Tyr513)產(chǎn)品名稱: 上皮盤狀結(jié)構(gòu)域受體1抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse

應(yīng)用類型: Other英文名稱: LYPD3英文別名: C4.4A;

Tyrosine Hydroxylase產(chǎn)品名稱: Tyrosine Hydroxylase交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat

Alpha-synuclein (nitro-Tyr39)產(chǎn)品名稱: 硝基化α-突觸核蛋白/n-syn抗體產(chǎn)品別名: α Synuclein; α-Synuclein; nitrated α-synuclein; n-syn.

Acetyl-Histone H4 (Lys16)交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Goose, Zebrafish, Sheep, GPV, Firefly, Bee, Belt Jellyfish, Fish, GuineaPig, Hamster, Shrimp, Fruit Fly, Goat, Monkey, Cat, Donkey, Duck, Chimpanzee, Arabidopsis Thalian抗體來源: Rabbit

RBM20產(chǎn)品名稱: RNA結(jié)合蛋白20抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Sheep

CCDC102B產(chǎn)品名稱: 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體交叉反應(yīng): Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep   

雙特異性磷酸酶1(DUSP1)重組蛋白人B細胞活化因子受體(BAFF-R)ELISA試劑盒BAFF-RB細胞活化因子受體elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor,BAFF-R ELISA Kit

人B細胞分化因子(BCDF)ELISA試劑盒BCDFB細胞分化因子elisa檢測試劑盒Human B cell differetiation factor，BCDF ELISA Kit

人B細胞κ輕肽基因增強子核因子ε(NFKBIE)ELISA試劑盒NFKBIEB細胞κ輕肽基因增強子核因子εelisa kitHuman NFKBIE ELISA Kit

人B群鏈球菌多糖抗體(IgG)ELISA試劑盒IgGB群鏈球菌多糖抗體ELISA試劑盒Human Anti-Group B Streptococcal Type III Capsular Antibody IgG ELISA Kit

人B淋巴細胞抗原(CD20)ELISA試劑盒CD20B淋巴細胞抗原elisamei聯(lián)免疫試劑盒Human CD20 ELISA Kit