產(chǎn)品名稱：膀胱平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號(hào)：YS-02X10042

細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn) ：細(xì)胞生長(zhǎng)良好，形態(tài)正常

儲(chǔ)存條件：2℃-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細(xì)胞特性：

1)】組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常眼組織。

2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

（1）凍存前細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞最好在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞密度適合，剛剛發(fā)生細(xì)胞融合，過(guò)密或連成片的細(xì)胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數(shù)量級(jí)比較好，我凍存的細(xì)胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶?jī)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個(gè)細(xì)胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對(duì)于腫瘤細(xì)胞株而言要求不是很嚴(yán)格，我從10%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認(rèn)為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細(xì)胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細(xì)胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細(xì)胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(zhǎng)，-80度過(guò)夜，最后液氮。對(duì)于條件較好的實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞凍存數(shù)量多的實(shí)驗(yàn)室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

TLR1/FITC 熒光素標(biāo)記Toll樣受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) Bcl-xL蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

細(xì)胞粘合素抗體  Tenascin/TN 0.1ml

Phospho-Smad2(Thr220) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD2抗體 0.1ml

Phospho-Ezrin (Thr567) 英文名稱： 磷酸化埃茲蛋白抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-LEO1(Ser551) 磷酸化RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體 規(guī)格 0.1ml

Bcl-xL(human, mo, rat, bovine, dog, pig, sheep, horse) Bcl-xL蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

MAdCAM-1(Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1) ELISA Kit 人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

 phospho-FOXO4 (Ser262) 磷酸化叉頭蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse  human IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

C/EBP Delta(Human CCAAT/enhancer binding protein deta) ELISA Kit 人CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δ 96T

SPOCK1 英文名稱： 蛋白聚糖1抗體 0.2ml

CHORDC1 英文名稱： 含半胱酸和組酸豐富域蛋白1抗體 0.2ml

 phospho-FOXO4 (Ser262) 磷酸化叉頭蛋白4抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rabbit  horse IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FGF14 英文名稱： 成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子14抗體 0.2ml

c-erbB-4癌基因抗體  C-erbB-4/HER4/erbB-4 0.1ml

 Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化μ-型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKC-γ/SCA14 蛋白激酶C亞型G抗體 規(guī)格 0.2ml

Rabbit  mouse IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
膀胱平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基BAD（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克人受體酪酶（RTKs）ELISA試劑盒,

BAX（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克人甲狀腺球蛋白（TG）ELISA試劑盒,

BCL2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克人受磷蛋白（PLN）ELISA試劑盒,

Caspase 1 （抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克小鼠嗜酸粒趨化蛋白Eotaxin 1（Eotaxin 1/CCL11）ELISA試劑盒,

Caspase-2-G（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克大鼠凋亡相關(guān)因子（FAS/CD95）ELISA試劑盒,

Caspase-3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克大鼠β素（BTC）ELISA試劑盒,

Caspase-4 p20（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克大鼠雌三醇（E3）ELISA試劑盒,

Caspase 6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克雞神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）ELISA試劑盒,

Caspase-7（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克兔子補(bǔ)體片斷3a（C3a）ELISA試劑盒,

Caspase-8（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克賴 脫羧酶肉湯

Caspase-9（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克L-天門冬鉀

Caspase 10（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克BOC-L-脯

MYC（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克L-甲狀腺素

TNF alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克二氫楊梅素 Dihydromyricetin

TNF beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克T4 DNA聚合酶

使用步驟：

一）準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標(biāo)記劃線，加熱溶解，補(bǔ)充水分，測(cè)定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計(jì)測(cè)定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過(guò)濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過(guò)濾至透明。

（四）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶?jī)?nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準(zhǔn)備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因?yàn)檎羝拇┩噶?qiáng)，殺菌效果好。