原代細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長(zhǎng)的重要指標(biāo),如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。目前常用的方法有很多,如有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素?fù)饺敕?、MTT法等。本文總結(jié)了一些常用的細(xì)胞活性檢測(cè)方法的原理、特點(diǎn)，并對(duì)比了各自的優(yōu)缺點(diǎn)。
一、染色計(jì)數(shù)法
1. 化學(xué)染色法
染色計(jì)數(shù)法是細(xì)胞培養(yǎng)中檢查細(xì)胞死活zui常用的方法，直接利用死細(xì)胞和活細(xì)胞對(duì)染料的不同親和力，檢查細(xì)胞活性，能在光學(xué)顯微鏡下觀察到染色結(jié)果?？煞譃閮深悾核兰?xì)胞著色法和活細(xì)胞著色法。使死細(xì)胞著色的常用染料有臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑、伊紅Y。能使活細(xì)胞著色的常用染料有結(jié)晶紫、亞甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)等。其中zui常用的是臺(tái)盼藍(lán)染色法。細(xì)胞損傷或死亡時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)可穿透變性的細(xì)胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色，而活細(xì)胞能阻止染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，故可以鑒別死細(xì)胞與活細(xì)胞。通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)可得出細(xì)胞的存活率。

本染色法方便實(shí)用，價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單。但是臺(tái)盼藍(lán)染色時(shí)，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則部分活細(xì)胞也會(huì)著色，會(huì)干擾計(jì)數(shù)。而且，細(xì)胞沒(méi)有經(jīng)過(guò)固定，形態(tài)不清晰。

2. 熒光染色法
一些熒光染料對(duì)死細(xì)胞和活細(xì)胞也有不同的作用效果，利用熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞活性。如碘化丙啶（PI），被活細(xì)胞排斥但能穿透正在死亡或已經(jīng)死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此活細(xì)胞不被染料上色，只有死細(xì)胞或凋亡細(xì)胞才能被染上紅色。吖啶橙（AO）能透過(guò)質(zhì)膜完整的細(xì)胞，嵌入細(xì)胞核DNA，使之發(fā)出明亮的綠色熒光。溴乙錠（EB）僅能透過(guò)胞膜受損的細(xì)胞，嵌入核DNA，發(fā)橘紅色熒光。也可應(yīng)用AO-EB雙染法鑒定細(xì)胞死活。

原代細(xì)胞這種檢測(cè)方法相比傳統(tǒng)的染料，具有靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果容易分辨等特點(diǎn)，而且利用雙染法還可以分辨活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞、凋亡晚期細(xì)胞、死亡細(xì)胞。在細(xì)胞凋亡的檢測(cè)上有很廣泛的應(yīng)用。

缺點(diǎn)在于，要求特殊的儀器進(jìn)行檢測(cè)，如熒光顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀。而且通過(guò)熒光染料具有毒性，操作時(shí)需要帶手套。
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原代細(xì)胞